在細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域，很多研究者在使用血清時會糾結(jié)一個問題：到底要不要熱滅活？

尤其是對于胎牛血清（FBS）——這被稱為“細(xì)胞的黃金營養(yǎng)液”——有些實驗室沿用舊習(xí)慣，習(xí)慣性地將其56℃熱處理30分鐘，以“滅活補體”。

但今天，我們想和大家從一個發(fā)育免疫學(xué)的角度，來講明白一個結(jié)論：

對于高品質(zhì)的胎牛血清，大多數(shù)實驗不再需要熱滅活處理！

01補體系統(tǒng)到底是什么？

補體系統(tǒng)是人體和動物先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分，由30多種血漿蛋白組成。這些蛋白在遇到細(xì)菌、病毒或異常細(xì)胞時，可以：

· 直接破壞細(xì)胞膜，誘導(dǎo)溶解；

· 吸引免疫細(xì)胞，放大炎癥反應(yīng)；

· 配合抗體清除抗原。

然而，補體的這種“攻擊力”，在細(xì)胞培養(yǎng)體系中往往是一個干擾因素，尤其是對于免疫細(xì)胞或干細(xì)胞，它們對補體非常敏感，輕則狀態(tài)不佳，重則直接死亡。

02胎牛體內(nèi)的補體發(fā)育情況

很多人不知道，胎牛（fetal bovine）并不是一個免疫成熟的個體。

從胚胎發(fā)育角度看：

換句話說：胎牛血清中補體天然就少，且活性弱，不具備真正意義上的細(xì)胞殺傷力。

03熱滅活，反而可能適得其反？

傳統(tǒng)的熱滅活操作是在56°C水浴30分鐘，用來破壞補體蛋白。

但這個步驟也有副作用：

? 降解了有價值的生長因子和細(xì)胞因子；

? 增加蛋白質(zhì)聚集，形成沉淀；

? 批次間差異增大，影響實驗可重復(fù)性；

? 縮短血清的有效期和活性窗口。

對于現(xiàn)代工藝制備的FBS產(chǎn)品，再做熱滅活反而是一種“過

04為什么以前的細(xì)胞培養(yǎng)要熱滅活血清？

2010年之前，國內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)用的血清主要是新生牛血清，胎牛血清極少，隨著肉牛屠宰的規(guī)?；ヅＱ逶祥_始出現(xiàn)，逐漸代替了新生牛血清。因此，在新生牛血清的時代，熱滅活有一定的意義，很多實驗室也養(yǎng)成了習(xí)慣。

05哪些情況例外？仍可熱滅活！

雖然大部分情況不需要，但在以下特殊情境下，熱滅活仍然有意義：

● 做補體依賴性細(xì)胞毒實驗（CDC）的對照組；

● 培養(yǎng)對補體極度敏感的原代細(xì)胞，如PBMC；

● 某些動物實驗中，為排除補體變量；

● 已知某批次血清含有微量殘留補體活性（通過檢測或預(yù)試驗判斷）。