細胞名稱:HK-2人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞

貨號：WS60105（STR鑒定）

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞介紹

一、細胞特性

1） 來源：腎皮質(zhì)/近端小管

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10^6  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。 

二、運輸和保存 

干冰運輸及復蘇好存活細胞 

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。 

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。 

三、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備 

1）準備角質(zhì)細胞無血清培養(yǎng)基 (推薦：WS-0019培養(yǎng)基，包含兩個組份：基礎(chǔ)培養(yǎng)基1瓶+生長因子1管：1mL或者5mL兩種）添加對應(yīng)因子按照收到的生長因子對應(yīng)規(guī)格：1mL加0.2%, 5mL 加1%，同時添加1% P/S 來培養(yǎng)細胞?；蛘?準備Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019) 來培養(yǎng)細胞。

備注:

1. Defined K-SFM (part of kit NO:,10744-019)培養(yǎng)液包含兩個組份：基礎(chǔ)培養(yǎng)基1瓶500mL（貨號10785-012）+生長因子1管1mL  ( 貨號10784-015).

2. 該細胞貼壁較慢，為使細胞貼壁更容易，建議可提前在培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶中鋪0.25%的明膠溶液，并于貼壁24~48小時后再進行后續(xù)操作。

3. 該細胞生長依賴于人表皮生長因子EGF，故而生長不能過密，請在融合度達到80%時進行傳代。

4.使用0.05%胰酶消化細胞，由于角質(zhì)細胞無血清培養(yǎng)基或者Defined K-SFM為無血清培養(yǎng)液無法終止胰酶消化，所以消化完成后要通過離心（建議125xg離心5到10分鐘）（或者加入加入3-4ml用RPMI1640或者DMEM等基礎(chǔ)培養(yǎng)基配置的含10%FBS）的培養(yǎng)基來終止消化，1000rpm/5min,去除胰酶后再加入細胞完全培養(yǎng)液進行傳代培養(yǎng)。

5.Defined K-SFM是一種無血清培養(yǎng)基，添加生長因子后請不要過濾。在無血清培養(yǎng)體系中，HK-2細胞生長緩慢并且需要一些時間才能貼壁，在培養(yǎng)基中看到許多圓形，漂浮和折射細胞是正常情況，不要丟棄松散附著和圓形的漂浮細胞，收集離心后可以重新加入到培養(yǎng)瓶中。 

血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養(yǎng)方式以隨貨說明書為準！?。?！

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

四、傳代方法

收到細胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

（一)如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細胞脫落后，加入2ml 以上完全培養(yǎng)基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。

4、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯(lián)系。