細胞名稱:HMEC-1 人微血管內(nèi)皮細胞株（有限細胞系）

貨號：WS60107（STR鑒定）

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞介紹

HMEC-1細胞(標識號：CSTR:19375.09.3101HUMGNHu46）是從一位男性患者包皮中分離出的微血管內(nèi)皮細胞，后經(jīng)pSVT載體轉(zhuǎn)染后，顯示出保留了很多內(nèi)皮細胞的特性，且通過連續(xù)傳代獲得的永生化細胞株。作為永生化細胞株，HMEC-1細胞是人類內(nèi)皮微血管細胞的持續(xù)可再生來源之一，也可用于構(gòu)建人真皮微血管內(nèi)皮細胞體外模型，用于許多研究。

一、細胞特性

1） 來源：人 新生兒 男性 真皮

2） 形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣  貼壁生長

3） 含量：>1x10^6  細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。 

二、運輸和保存 

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞 

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。 

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。 

三、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備 

1）MCDB131 培養(yǎng)基（GIBCO貨號：10372019），90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清。10%；hEGF (SIGMA 貨號：E9644或者iCell-C0298）10ng/ml，1% P/S。 

血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養(yǎng)方式以隨貨說明書為準?。。。?/span>

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。傳代周期  3-5天  隔天換液 。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

四、傳代方法

收到細胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

（一)如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細胞脫落后，加入2ml 以上完全培養(yǎng)基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。

4、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯(lián)系。