細(xì)胞名稱:HT-29 人結(jié)腸癌細(xì)胞

貨號(hào)：WS60113（STR鑒定）

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞介紹

1964年，HT-29細(xì)胞系由J.Fogh用移植培養(yǎng)方法和含15%FBS的F12培養(yǎng)液從原發(fā)性腫瘤分離。近來，已建株的培養(yǎng)細(xì)胞用含血清McCoy’s 5A培液培養(yǎng)。該細(xì)胞系在裸鼠中致瘤，也能在類固醇處理的地鼠中致瘤。

一、細(xì)胞特性

1） 來源：結(jié)腸癌

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。 

二、運(yùn)輸和保存 

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞 

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。 

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。 

三、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備 

1） 準(zhǔn)備McCOY's 5A（推薦WS-P-0011）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。注意事項(xiàng)：HT-29復(fù)蘇后第一周可能會(huì)有大量漂浮細(xì)胞，可更換新鮮培養(yǎng)液，同時(shí)將漂浮的細(xì)胞離心收集后加回到培養(yǎng)瓶中與貼壁細(xì)胞共同培養(yǎng)。新復(fù)蘇的細(xì)胞會(huì)以補(bǔ)丁形態(tài)三維接觸生長（即不是單層扁平生長），待細(xì)胞分裂生長后將會(huì)變回上皮細(xì)胞形態(tài)單層扁平生長。

血清我們推薦FBS500-WP-002

注：具體培養(yǎng)方式以隨貨說明書為準(zhǔn)！?。。?/span>

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

四、傳代方法

收到細(xì)胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個(gè)細(xì)胞生長情況。

（一)如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細(xì)胞已長滿，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細(xì)胞脫落后，加入2ml 以上完全培養(yǎng)基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細(xì)胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細(xì)胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X或20X物鏡下。

2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內(nèi)。

4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。