細胞名稱：OVCAR-8/ADR 人卵巢癌腺癌阿霉素耐藥細胞

貨號：WS-h382（STR鑒定）

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

用途：僅供科研使用

一、細胞特性

OVCAR-8/ADR為由OVCAR-8細胞構(gòu)建的耐ADR藥物細胞株。

1、來源：高級別卵巢漿液性腺癌  女  64歲

2、形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

二、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

1.  準備RPMI-1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%

血清我們推薦 FBS500-WP-002

  細胞培養(yǎng)試劑的配制

1）ADR藥物的配制及保存

建議將ADR藥物配制成1mg/mL的母液，即使用10mL PBS溶液溶解10mg ADR藥物，使其完全溶解后，使用0.22um濾器過濾除菌。

注意：可根據(jù)用量配置藥物，并將藥物分裝保存，避免反復凍融導致藥物失效。溶解后的Taxol，4℃保存1周，-20℃保存1個月，-80℃保存6個月。

2）凍存液的配制

90%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。（凍存液中不含藥物）

3）完全培養(yǎng)基的配制（推薦使用iCell-h382-001b）

2  培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3  凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

三、細胞處理

1）凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細胞后，均勻鋪于含6~8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中，置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

注意：①細胞復蘇過程中，不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細胞生長至匯合度達80%左右時，方可添加400ng/mL ADR藥物；若細胞生長狀態(tài)較為緩慢，可適當降低ADR的濃度（首次降低一半藥物濃度），或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的ADR濃度。

②建議復蘇細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸，造成人員傷害。

2）細胞傳代（建議以同等底面積的培養(yǎng)瓶/皿按照1：2比例傳代）

①待細胞密度達到80%~90%時，即可進行傳代培養(yǎng)。

②棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次，吸凈殘余的PBS。

③加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化2~5min，顯微鏡下觀察細胞細胞大部分變圓并脫落，即可輕拍培養(yǎng)瓶至細胞全部脫落。迅速拿回操作臺，加入2倍體積的、含10%FBS的培養(yǎng)基中止消化。 

④將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min離心5min，棄去上清液。

⑤向細胞沉淀中加入1~2mL完全培養(yǎng)基重懸細胞，輕吹混勻。將細胞懸液按1：1的比例均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶/皿中，添加6~8mL完全培養(yǎng)基。

注意：細胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至500ng/mL繼續(xù)培養(yǎng)；若此過程中細胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞匯合度約80%，且生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的ADR藥物濃度。

3）細胞凍存

①細胞凍存時，步驟同2）細胞傳代的①~④，細胞計數(shù)后，加入配制好的細胞凍存液，重懸細胞，按照1×106 ~ 1×107個細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

注意：細胞凍存過程中，不可添加藥物。

②將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。