U-Ch1 人骶骨脊索瘤細(xì)胞

貨號(hào)：WS0393H

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞介紹

U-CH1 是一種間充質(zhì)樣細(xì)胞系，于 1998 年從一名 56 歲白人男性脊索瘤患者的骶骨中分離出來(lái)。該細(xì)胞系是根據(jù)初次手術(shù) 4 年后放療后骶尾部局部復(fù)發(fā)建立的。脊索瘤是一種罕見(jiàn)的生長(zhǎng)緩慢的腫瘤類型，U-CH1是一種生長(zhǎng)相對(duì)緩慢的細(xì)胞系。U-CH1具有由漿細(xì)胞和粘液性細(xì)胞間質(zhì)組成的異質(zhì)形態(tài)，代表典型的脊索瘤特征。這些細(xì)胞過(guò)度表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子 T (Brachyury)，這是脊索瘤最特異的標(biāo)志物。

一、細(xì)胞特性

1） 來(lái)源： 56歲白人男性脊索瘤患者的骶骨

2） 形態(tài)：半貼壁，顆粒狀，富含膠原，有空泡，形態(tài)不規(guī)則

3） 含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

6) 培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

A. 準(zhǔn)備IMDM加RPMI-1640(4:1) 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，20%； 1 % L-谷氨酰胺；雙抗，1%。                       

血清推薦WinSera   FBS500-WP-002

B.培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

C.凍存液：90%胎牛血清，10%DMSO 現(xiàn)用現(xiàn)配。

凍存液推薦WinSera  WS-1026-50ml/100ml

  儲(chǔ)存：液氮儲(chǔ)存

二、運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

1.復(fù)蘇發(fā)貨  a.T25瓶活細(xì)胞發(fā)貨或 b.血清重懸發(fā)貨
2. 凍存管發(fā)貨(干冰發(fā)貨)  

A.1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

B.T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

三、 細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

下面T25瓶為例；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

備注：

1. 運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

2.培養(yǎng)條件一般不是一成不變，以實(shí)驗(yàn)室發(fā)貨備注培養(yǎng)條件為準(zhǔn)。