細胞名稱：ARPE-19 人視網膜色素上皮細胞

貨號：WS60027（STR鑒定）

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

一、細胞特性

該細胞系源自于一名19歲車禍罹難的健康男性的視網膜組織，由Amy Aotaki-Keen建系于1986年。該細胞系表達視網膜色素細胞特有的分子標記如胞內視黃醛結合蛋白和PRE-65。

1） 來源：視網膜

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x106  細胞數

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

二、運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

三、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

1）準備DMEM/F-12培養(yǎng)基（推薦WS-P-0004）；優(yōu)質胎牛血清， 87%；雙抗，1%。

 血清我們推薦FBS500-WP-002

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

四、 傳代方法

收到細胞后，在倒置鏡下(最好是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

（一）如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細胞已長滿，即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)液，用PBS（不含鈣,鎂離子）洗1-2次。

2. 加0.7-1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，用力拍打瓶壁，期間每隔 5-10s放到顯微鏡下觀察，直至50-70%的細胞脫落后，加入2ml 以上完全培養(yǎng)基中止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二。

注：

1、觀察細胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現貼壁細胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶內。

4、收到細胞后，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請及時與我們聯(lián)系。